Автор: Андрей Смирнов Время чтения: ~12 мин. Просмотров: 1

Качественное определение белка в моче

Оснащение рабочего места

В состав рабочего места по определению белка в моче входят следующие элементы:

  1. Пробирки химические, агглютинационные.
  2. Набор градуированных пипеток.
  3. Пипетки с узким оттянутым концом.
  4. Спиртовки или газовая горелка.
  5. Черная бумага.
  6. Ледяная уксусная кислота.
  7. Сульфосалициловая кислота.
  8. Концентрированная азотная кислота.
  9. Дистиллированная вода.

на анализ белка?

Правила сбора биоматериала общие как для взрослых мужчин, так и для женщин и детишек, которые достигли определенного возраста и могут самостоятельно пользоваться горшком.

  1. Непосредственно перед сбором урины необходимо выполнить туалет наружных половых органов.
  2. Первая порция биоматериала не учитывается. Однако фиксируется время утреннего мочеиспускания.
  3. Собирают всю выделяемую жидкость в течение 24 часов. В ночное время также продолжается сбор урины.
  4. Тару с биоматериалом рекомендуется хранить при температуре не выше 8 градусов и не ниже 5.
  5. Сразу после забора последней порции, собранную мочу следует тщательно перемешать.
  6. Предварительно у доктора следует уточнить, как сдавать суточный анализ мочи на белок в лабораторию. Существует два способа. Около 100 мл биоматериала отливают в емкость маленького размера и относят в лабораторию или можно доставить весь суточный объем в большой таре.
  7. В случае, когда имеет значение изменение диуреза за сутки, то доктор рекомендует фиксировать объем любой потребляемой жидкости в течение 24 часов.

Как собирать суточный анализ мочи на белок детям до года? Такой вопрос интересует молодых мамочек. При назначении подобного исследования малышам, педиатры советуют приобрести специальное устройство для сбора биоматериала, которое свободно продается в аптеках. Не следует выжимать жидкость из подгузников или ловить момент, когда малыш захочет помочиться.

Белок в моче

В крови у человека белок отсутствует или его количество настолько мало, что не определяются при помощи лабораторных анализов. В случае выявления в моче белка, необходимо провести повторные анализы, так как он может присутствовать при утреннем пробуждении человека, а также после тяжелой физической работы или нагрузки у спортсменов.

Определить визуально, присутствует ли белок в моче или нет, на 100% невозможно. Можно лишь догадываться, когда в моче имеется большое количество беловатого цвета хлопьев.

Если белок в моче повторно обнаруживается, это указывает на наличие какого-либо заболевания почек. Воспалительные процессы, происходящие в них, провоцируют небольшое увеличение количества белка. Если же с мочой его выделяется более 2 грамм — это тревожный сигнал.

Пиелонефрит — это воспалительное заболевание, при котором поражаются почечная лоханка, чашечки и паренхима. В большинстве случаев причиной воспаления является бактериальная инфекция. Полное выздоровление возможно лишь при своевременной диагностике, поэтому при появлении симптомов а необходимо тщательное обследование.

Небольшое количество белка в суточной моче обнаруживается и у вполне здоровых лиц, однако такие небольшие концентрации не выявляют в разовых порциях используемыми в настоящее время методами. Приблизительно 70% белков мочи здорового человека приходится на долю уромукоида — белка, являющегося продуктом почечной ткани; таким образом, доля гломерулярного белка в моче здоровых людей является ничтожно малой и протеинурия в норме составляет 50-150 мг/сут, причем большинство белков мочи идентично сывороточным.

Принято различать следующие формы протеинурии в зависимости от места возникновения: преренальную, связанную с усиленным распадом белка тканей, выраженным гемолизом; ренальную, обусловленную патологией почек, которая может быть разделена на клубочковую и канальцевую; постренальную, связанную с патологией мочевыводящих путей и чаще всего обусловленную воспалительной экссудацией.

В зависимости от длительности существования выделяют постоянную протеинурию, существующую в течение многих недель и даже лет, и преходящую, появляющуюся периодически, иногда даже при отсутствии патологии почек, например при лихорадке и выраженной интоксикации. Целесообразно различать вариабельность протеинурии: при суточной потере белка до 1 г — умеренную, от 1 до 3 г — среднюю и более 3 г — выраженную.

Большинство качественных и количественных методов определения белка в моче основаны на его коагуляции в объеме мочи или на границе сред (мочи и кислоты); если есть способ измерить интенсивность коагуляции, то проба становится количественной.

Диагностика

Различают виды протеинурии по патогенезу (механизмам образования), времени появления, степени выраженности, локализации источника патологии. Все они описаны в Международной классификации болезней. Повышение белка в мочевой жидкости имеет код МКБ-10 R80. По месту развития патологических процессов выделяется:

  • Протеинурия преренальная – распад белковых структур усиленно протекает в тканях либо активно разрушаются эритроциты, секретируя большое количество гемоглобина.
  • Протеинурия ренальная – патология наблюдается в почечных канальцах и клубочках. Если поврежден именно гломерулярный фильтр – это протеинурия клубочковая. При неспособности канальцевой системы почек реабсорбировать альбумины из плазмы крови говорят о протеинурии тубулярной.
  • Протеинурия постренальная – диагностируется при болезнях нижних отделов мочевыделительной системы (мочевого пузыря, уретры, половых органов, мочеточника).

Дифференциальная диагностика протеинурии между тубулярной и клубочковой формами проводится на основании количества обнаруженного белка, а также сопутствующих симптомов. При поражении клубочков часто наблюдается выраженная протеинурия, которая сопровождается отеками тканей. При патологии канальцев экскреция альбуминов не так выражена. Для уточнения диагноза смотрят и на такие параметры урины, как лейкоциты, эритроциты, бактерии, слизь, сахар, нитриты.

По тому, какие именно белковые структуры проникают в мочу, протеинурия бывает селективной, когда выделяются в биоматериал исключительно альбумины и другие микропротеины. При протеинурии неселективной в образце, кроме низкомолекулярных, появляются структуры со средней и высокой молекулярной массой (глобулины, липопротеиды).

Чтобы диагностика была достоверной, важно соблюдать правила сбора образца и подготовки к анализу, зависят они от назначенного метода исследования.

Люди часто интересуются, что нельзя есть перед сдачей мочи? На самом деле, особых ограничений по продуктам нет, разве что не рекомендуется обильное белковое питание. В течение суток перед тем, как собирать биоматериал, нельзя употреблять алкоголь. На результаты также влияет прием некоторых препаратов (антибиотиков, аспирина) и неправильно собранный биоматериал. Мочегонные средства нельзя использовать в течение 2-х дней перед анализом.

Сама по себе протеинурия не дает оснований для постановки диагноза, чтобы уточнить причины выделения белка с мочой, необходимы дополнительные анализы, инструментальная диагностика и сбор анамнеза.

Внепочечная (постренальная) протеинурия

При внепочечных (постренальных) протеинуриях белок может попасть в мочу из мочевыводящих и половых путей (при кольпитах и вагинитах — при неправильно собранной моче). В данном случае это ни что иное, как примесь воспалительного экссудата.

Внепочечная протеинурия, как правило, не превышает 1 г/сут., часто носит преходящий характер.

Диагностике внепочечной протеинурии помогает проведение трехстаканной пробы и урологическое обследование.

Постренальная протеинурия бывает при циститах, уретритах.

Качественные методы

На данный момент существует около 100 известных качественных реакций на белок. Они заключаются в осаждении протеина методом физических или химических воздействий. При положительной реакции происходит помутнение.

Наиболее информативными являются пробы:

  • С сульфосалициловой кислотой. Считается наиболее чувствительной и с ее помощью возможно определение даже самых незначительных количеств белковых тел в моче. Описание результата при следовом присутствии протеина обозначается термином «опалесценция», а при большем количестве — «слабо положительная», «положительная» и при большой потере белка с мочой — «сильно положительная реакция».
  • С заместителем кислоты — асептолом. В урину добавляется раствор вещества, и при образовании кольца на границе растворов, говорится о том, что проба является положительной.
  • Геллера. Производится при помощи раствора азотной кислоты. Итог проведения трактуется аналогично той, что с асептолом. Иногда кольцо может быть во время присутствия в исследуемой жидкости уратов.
  • С уксусной кислотой с добавлением селезистосинеродистого калия. При высокой концентрации мочи при проведении такой пробы, ее разбавляют, иначе может получиться ложноположительный результат, так как реакция будет на ураты и мочевую кислоту.

Неправильное проведение такой пробы часто может давать неверный результат у новорожденных детей, так как у них моча образуется с высоким содержанием мочевой кислоты.

Основные правила при проведении проб заключаются в следующем — необходимо, чтобы исследуемая моча была прозрачная, имела слабокислую среду (для этого иногда добавляют в нее небольшое количество уксусной кислоты), пробирок должно быть две для осуществления контроля.

Исследование биоматериала на протеины

Методы определения белка в моче подразделяют на качественные, количественные, полуколичественные. Качественные применяют для скрининга, так как их результаты не особо надежные. Основаны такие методики на свойствах протеинов к денатурации при химических и физических воздействиях. Во время качественного определения белка в моче образец должен быть прозрачным, иначе присутствие белкового осадка сложно будет различить. Если образец мутный, в него добавляют тальк либо магнезию и фильтруют. Наиболее распространенные качественные анализы – методика Геллера, реакция с сульфосалициловой кислотой.

Полуколичественным является унифицированный метод Брандберга-Робертса-Стольникова и экспресс-методы. Удобны они тем, что позволяют легко определить высокое содержание протеинов в моче в домашних условиях. Образец собирается по правилам, затем в него опускают специальные тест-полоски. Проверяется либо суточная моча на белок, либо разовая порция. Оценивают результат по цветовой шкале или с помощью анализатора.

Количественное определение белка в моче предпочтительнее, но требуют соблюдения множества специфических условий. Поэтому и такие пробы нередко дают ложные результаты. Наиболее точными считаются колориметрические пробы, которые базируются на цветовых реакциях белковых структур. Это биуретовый метод, тест Лоури, метод ПКГ (реакция с пирогаллоловым красным). Практически все количественные пробы для определения белка в моче чувствительны только к альбуминам. Наличие глобулинов, мукопротеинов либо структур Бенс-Джонса такое исследование не покажет. Поэтому если анализ на общий белок в моче отрицательный, но врач подозревает патологию, назначают дополнительные диагностические процедуры. Для выявления разных типов протеинов используют иммунохимические исследования и эректрофорез.

Несмотря на то, что и общий анализ мочи (ОАМ), проведенный по разовой утренней порции может показать наличие протеинов, для обнаружения патологии почек рекомендуется исследовать суточный белок в моче. Связано это с тем, что в течение дня выделение протеинов колеблется, и диурез влияет на их концентрацию. Если нет возможности сдать суточный анализ мочи на белок, рекомендуется провести расчет в разовой порции соотношения протеина с креатинином, поскольку он постоянно выделяется с одинаковой скоростью. Преимущество такой диагностики еще и в том, что исключаются ошибки, связанные со сложностями самостоятельно правильно собрать суточную мочу.

Почечная протеинурия

Почечная протеинурия обусловлена повреждением гломерулярного фильтра или дисфункцией эпителия извитых почечных канальцев.

Выделяют селективную и неселективную протеинурию
в зависимости от соотношения тех или иных плазматических и мочевых белков, их молекулярной массы и заряда.

Селективная протеинурия

Селективная протеинурия встречается при минимальном (нередко обратимом) нарушении гломерулярного фильтра, представлена низкомолекулярными белками (молекулярная масса не выше 68 000) — альбумином, церулоплазмином, трансферрином.

Неселективная протеинурия

Неселективная протеинурия чаще встречается при более тяжелом повреждении фильтра, когда начинают теряться крупномолекулярные белки. Селективность протеинурии является важным диагностическим и прогностическим признаком.

Почечная протеинурия может быть:

  • органической и
  • функциональной (физиологической).

Органическая почечная протеинурия

Органическая почечная протеинурия возникает при органическом поражении нефрона. В зависимости от преимущественного механизма возникновения можно выделить определенные типы органической протеинурии.

Клубочковая протеинурия

Клубочковая протеинурия — обусловлена повреждением гломерулярного фильтра, возникает при гломерулонефритах и при нефропатиях, связанных с обменными или сосудистыми заболеваниями. (гломерулонефрит, гипертоническая болезнь, действие инфекционных и аллергических факторов, декомпенсация сердечной деятельности)

Канальцевая протеинурия

Канальцевая протеинурия — связана с неспособностью канальцев реабсорбировать плазменные низкомолекулярные белки, прошедшие через неизмененный гломерулярный фильтр. (амилоидоз, острый канальцевый некроз, интерстициальный нефрит, синдром Фанкони)

Преренальная протеинурия

Преренальная протеинурия (избыточная) — развивается при наличии необычно высокой плазматической концентрации низкомолекулярного белка, который фильтруется нормальными клубочками в количестве, превышающем физиологическую способность канальцев к реабсорбции. (миеломная болезнь, некроз мышечной ткани, гемолиз эритроцитов)

Функциональная почечная протеинурия

Функциональная почечная протеинурия не связана с заболеваниями почек и не требует лечения.

К функциональным протеинуриям относят:

  • маршевую,
  • эмоциональную,
  • холодовую,
  • интоксикационную,
  • ортостатическую (только у детей и только в положении стоя).

Работа нефронов и протеинурия

При ультрафильтрации в состав первичной мочи попадает большое количество различных белковых молекул и аминокислот. Оно и не удивительно, для большинства белок средний размер превышает порог прохождения через мембраны. А молекулы аминокислот являются полярно заряженными. Это также играет роль при их «задержании» на поверхности мембран. Однако в процессе прохождения первичной мочи по канальцам нефрона практически все белки и аминокислоты реабсорбируются (подвергаются обратному всасыванию) в кровь. Из-за чего, вторичная моча может содержать не более сотых доле грамма протеинов.Определение белка

Нормальные цифры, при определении белка в моче стандартными методами не должны превышать 0,033 грамма на один литр.
За сутки же взрослый здоровый человек может выделять до 0,15 грамм. Причем около 1−2% из них являются альбуминами. Остальные же 90% приходятся на белки плазмы (их насчитывает около 30-ти видов) и гликопротеины — основные белки мембран. Последние появляются в моче за счет деятельности подоцитов. Так как, что при работе любой клетки неизбежно постоянное повреждение мембраны. Но это повреждений, во-первых не существенны, а во-вторых они быстро «затягиваются» благодаря постоянным процессам ее регенерации. Так же в эти 90% входят мукопротеиды — белковые молекулы, попадающие в просвет канальцев при работе эпителия петли Генле.

Различают несколько видов протеинурии.
Они строятся только на  основании анализа мочи на суточный белок.

  • Нормальная протеинурия. Выделение белка не превышаетуже известных 0,15 грамм за сутки.
  • Умеренная протеинурия. Выставляется при выделении более 0,15, но менее 3,5 грамм за сутки.
  • Массивная протеинурия означает, что почками выделяется более 3,5 грамм белковых молекул за 24 часа.

Обнаружение в моче белка Бенс-Джонса:

Белок Бенс-Джонса может выделяться с мочой при миеломной болезни, макроглобулинемии Вальденстрема.

Исследование целесообразно проводить только при положительной пробе с сульфосалициловой кислотой. Индикаторная бумага для обнаружения белка Бенс-Джонса непригодна.

Принцип:

Основан на реакции термопреципитации. Методы, с помощью которых оценивают растворение белка Бенс-Джонса при температуре 100 °С или повторное осаждение при последующем охлаждении, ненадежны, так как далеко не все белковые тела Бенс-Джонса обладают соответствующими свойствами. Наиболее достоверно выявление этого парапротеина осаждением его при температуре 40-60 °С, но и в этих условиях осаждение может не произойти в слишком кислой (рН 6,5) моче, при низкой относительной плотности мочи и при низкой концентрации белка Бенс-Джонса.

Необходимый реактивы:

2 М ацетатный буфер рН 4,9.

Ход исследования:

Профильтрованную мочу в количестве 4 мл смешивают с 1 мл буфера и согревают в течение 15 мин на водяной бане при температуре 56 °С. При наличии белков Бенс-Джонса уже в течение 2 мин появляется выраженный осадок, при концентрации белка Бенс-Джонса менее 3 г/л проба может получиться отрицательной. На практике это встречается крайне редко, так как большей частью концентрация белка Бенс-Джонса в моче значительная.

С полной достоверностью белок Бенс-Джонса может быть обнаружен иммуноэлектрофоретическим исследованием при использовании специфических сывороток против тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов.

Количественное определение белка в моче по помутнению, образующемуся при добавлении сульфосалициловой кислоты:

Принцип метода:

Интенсивность помутнения при коагуляции белка сульфосалициловой кислотой пропорциональна его концентрации.

Необходимые реактивы:

1. 3%-ный раствор сульфосалициловой кислоты.

2. 0,9%-ный раствор хлорида натрия.

3. Стандартный раствор альбумина — 1%-ный раствор (1 мл раствора, содержащий 10 мг альбумина): 1 г лиофилизированного альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9%-ного раствора хлорида натрия в колбе вместимостью 100 мл, а затем доводят до метки тем же раствором. Реактив стабилизируют прибавлением 1 мл 5%-ного раствора азида натрия (NaN3). При хранении в холодильнике реактив годен в течение 2 месяцев.

Специальное оборудование — фотоэлектроколориметр.

Ход исследования:

В пробирку вносят 1,25 мл профильтрованной мочи, доливают до 5 мл 3%-ным раствором сульфосалициловой кислоты, перемешивают. Через 5 мин измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 590-650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете длиной оптического пути 5 мм. Контролем служит пробирка, в которой к 1,25 мл профильтрованной мочи долили до 5 мл 0,9%-ный раствор хлорида натрия. Расчет ведут по калибровочному графику, для построения которого из стандартного раствора готовят разведения, как указано в таблице.

Из каждого полученного раствора берут 1,25 мл и обрабатывают, как опытные пробы.

Прямолинейная зависимость при построении калибровочного графика сохраняется до 1 г/л. При более высоких концентрациях пробу следует разводить и учитывать разведение при расчете.

Ложноположительные результаты могут быть получены при наличии в моче контрастных веществ, содержащих органический йод. Поэтому тест нельзя использовать у лиц, принимающих препараты йода; ложноположительный результат может быть также обусловлен приемом сульфаниламидных препаратов, больших доз пенициллина и при высоких концентрациях в моче мочевой кислоты.

Рейтинг автора
5
Подборку подготовил
Андрей Ульянов
Наш эксперт
Написано статей
168
Ссылка на основную публикацию
Похожие публикации